Журнал СФУ. Биология / Тест-система для выявления вируса клещевого энцефалита биолюминесцентным иммуноанализом

Полный текст (.pdf)
Номер
Журнал СФУ. Биология. 2020 13 (3)
Авторы
Кудрявцев, А.Н.; Буракова, Л.П.; Баринова, К.А.; Франк, Л.А.
Контактная информация
Кудрявцев, А.Н.: Институт биофизики СО РАН ФИЦ «Красноярский научный центр СО РАН Россия, 660036, Красноярск, Академгородок, 50/50; Буракова, Л.П.: Институт биофизики СО РАН ФИЦ «Красноярский научный центр СО РАН Россия, 660036, Красноярск, Академгородок, 50/50; Баринова, К.А.: Сибирский федеральный университет Россия, 660041, Кpаcнояpcк, пp. Cвободный, 79; Франк, Л.А.: Институт биофизики СО РАН ФИЦ «Красноярский научный центр СО РАН Россия, 660036, Красноярск, Академгородок, 50/50; Сибирский федеральный университет Россия, 660041, Кpаcнояpcк, пp. Cвободный, 79; Burakova, Ludmilа P.: Institute of Biophysics SB RAS FRC “Krasnoyarsk Science Center SB RAS” 50/50 Akademgorodok, Krasnoyarsk, 660036, Russia
Ключевые слова
вирус клещевого энцефалита (ВКЭ); биолюминесцентный иммуноанализ; гибридный белок 14D5а-Rm7; tick-borne encephalitis virus (TBEV); bioluminescent microassay; hybrid protein 14D5а- Rm7
Аннотация

Вирус клещевого энцефалита (ВКЭ) является инфекционным агентом тяжелого нейрозаболевания – клещевого энцефалита. Он переносится иксодовыми клещами, инфекция распространена по всей лесной и лесостепной зоне умеренного пояса Евразийского континента, в том числе в Сибирском регионе Российской Федерации. Несмотря на наличие коммерческих аналитических систем для выявления ВКЭ, задача разработки быстрых и достоверных методов анализа, пригодных для рутинного применения, в том числе и при экологических исследованиях, остается актуальной. В результате проведенных исследований разработана и испытана тест-система для выявления вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) в клещах твердофазным биолюминесцентным иммуноанализом. В качестве сенсора использовали гибридный белок, состоящий из одноцепочечного мини-антитела мыши к вирионному белку Е и термостабильного варианта люциферазы Renilla muelleri. Этот уникальный белок был получен и исследован авторами ранее. В работе рассмотрены варианты экспрессии гибрида рекомбинантными клетками E. coli разных штаммов и найдены оптимальные условия получения высокоочищенного препарата этого белка. Запуск биолюминесцентной реакции люциферазного домена осуществляли с помощью стабильной природной формы субстрата – Са2+-зависимого целентеразин-связывающего белка, рекомбинантый вариант которого был получен авторами ранее. Найдены условия долгосрочного хранения ключевых элементов системы – гибридного белка, стабильной формы субстрата люциферазы, активированных планшетов. Анализ осуществляется в высокопроизводительном микропланшетном варианте. Разработанным способом исследовано более 900 образцов природных клещей. По чувствительности (89,5 %) и специфичности (98,9 %) биолюминесцентный анализ не уступает колориметрическому, будучи при этом проще и быстрее

Страницы
310-321
DOI
10.17516/1997-1389-0296
Статья в архиве электронных ресурсов СФУ
https://elib.sfu-kras.ru/handle/2311/110373

Лицензия Creative Commons Эта работа лицензируется по лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License (CC BY-NC 4.0).