Журнал СФУ. Биология / Са2+-регулируемый фотопротеин обелин как N-концевой партнер при конструировании слитых белков

Полный текст (.pdf)
Номер
Журнал СФУ. Биология. 2010 3 (4)
Авторы
Еремеева, Е.В.; Франк, Л.А.; Маркова, С.В.; Высоцкий, Е.С.
Контактная информация
Еремеева, Е.В. : Институт биофизики СО РАН , Россия, 660036, Красноярск, Академгородок; Франк, Л.А. : Институт биофизики СО РАН Сибирский федеральный университет , Россия, 660036, Красноярск, Академгородок Россия, 660041, Красноярск, пр.Свободный, 79 , e-mail: ; Маркова, С.В. : Институт биофизики СО РАН Сибирский федеральный университет , Россия, 660036, Красноярск, Академгородок Россия, 660041, Красноярск, пр.Свободный, 79; Высоцкий, Е.С. : Институт биофизики СО РАН , Россия, 660036, Красноярск, Академгородок
Ключевые слова
обелин; генетическое удлинение по С-концу; cgreGFP; obelin; C-end fusing; cgreGFP
Аннотация

Са2+-регулируемые фотопротеины, генетически слитые с биоспецифическими полипептидами, широко используются как репортеры для внутриклеточного мониторинга Са2+, а также в анализе in vitro. Ранее было показано, что модификации фотопротеина акворина по С-концу приводят к потере его биолюминесцентной активности, поэтому химерные белки получали только присоединением полипептида к его N-концу. В представленной работе исследуется возможность получения слитых белков по С-концу другого фотопротеина - обелина. При этом вначале обелин (OL) генетически удлинили на одну аминокислоту - тирозин (Y), а затем получили обелин, слитый через длинный гибкий линкер (31 аминокислота) с зеленым флуоресцентным белком медузы Clytia gregaria (cgreGFP). Оба белка (OL-Y и OL-cgreGFP) были выделены, их основные свойства изучены. Показано, что OL-Y образует устойчивый фотопротеиновый комплекс, биолюминесцентная активность которого составляет 75 % активности обелина дикого типа (WT-OL). Активность OL-cgreGFP составляет 46 % от активности WT-OL. При запуске биолюминесцентной реакции ионами кальция наблюдается эффективный резонансный перенос энергии, в котором обелиновая часть химерного белка является донором, а cgreGFP - акцептором энергии. Таким образом установлено, что репортерные молекулы на основе Ca2+-регулируемого фотопротеина обелина могут быть получены генетическим слиянием с биоспецифическими полипептидами по его С-концу.

Страницы
372-383
Статья в архиве электронных ресурсов СФУ
https://elib.sfu-kras.ru/handle/2311/2248

Лицензия Creative Commons Эта работа лицензируется по лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License (CC BY-NC 4.0).